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重庆实验室仪器之显微镜观察检测细胞讲解

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重庆实验室仪器之显微镜观察检测细胞讲解

发布日期:2019-08-01 作者: 点击:

  活细胞对光是透明的。当光通过活细胞时,波长和振幅几乎没有变化,所以普通的光无法看到未经过滤的活细胞。1930年代荷兰泽尼克

  原理:利用光的衍射和干涉特点,光波的光程差通过标本的不同区域转化为一个振幅不同,所以在细胞内各种结构表现出清晰可见的光明与黑暗之间的对比,从而改变试样的各种结构。是明确的。

  通过相衬显微镜观察活细胞的步骤如下:(1)调整相衬显微镜(2)观察瓶的制备(3)调光;(4)调节和拍照(5)观察细胞

  细胞在生长状态下生长良好,在显微镜下可观察到高透明度、强折射率、轮廓不清的细胞。

  如果细胞生长状态差,细胞轮廓增强,细胞的折射率是削弱,液泡,脂滴和其它颗粒物质出现在细胞的细胞质,细胞之间的差距增加,细胞形状不规则,甚至原始细胞丢失。它的特点是收缩和脱落,有时细胞表面和周围有丝状物。

  各种细胞增殖的时间和细胞的世代是不同的。

  原代细胞和成体组织的潜伏期较长。24小时后,只有部分细胞开始粘附在细胞壁上,并将瓶底覆盖9-12天。细胞融合重叠生长。

  传代细胞系、胚胎组织或幼虫细胞的潜伏期较短,一般在悬浮和粘附拉伸后进入潜伏期和对数生长期。细胞增殖,逐渐连接成块,并在瓶底生长。一旦发现细胞在瓶底80%以上,应及时传代,否则会影响细胞生长,甚至脱落。

  当发现悬浮细胞在培养基中生长明显、密度增加、分布致密、发黄时,应及时传代。

  预防措施

  标准化生产的培养皿、培养瓶或培养皿一般具有良好的成像效果,但反复刷玻璃或塑料器皿会严重影响分辨率。

  观察瓶盘应平整,质地均匀,透光性好。观察前对培养瓶和培养皿表面进行清洗。

  当天气寒冷时,温差会使培养瓶内壁形成水滴,影响观察的清晰度。可以轻轻倾斜瓶子,使其渗透到瓶子内壁,获得良好的相位差图像。

  原发细胞培养液交换后应进行相衬显微镜检查,清除漂浮组织和坏死细胞,提高成像清晰度。

  观察细胞时观察不育的概念。运动应轻,避免剧烈震动;观察时间不宜过长,观察次数不宜过频繁,以免影响细胞生长。

  活细胞观察方法

  1、暗视野显微镜技术观察活细胞

  原理:采用专用聚光器,防止光线进入物镜。来自样品的散射光使物镜放大,从而在黑暗的背景下呈现出明亮的图像。优点:增强了对比度,提高了分辨率,可以观察到5纳米的小颗粒。

  用途:观察活细胞的细胞核、线粒体、细菌和霉菌。

  2. 延时缩微照相术观察

  优点:可以直接记录活细胞的连续动态过程,可以显示细胞生长过程中的动态变化,如细胞运动、细胞分裂、细胞膜变化、细胞死亡等。

  缺点:贵

  3.体外活细胞染色观察

  体外活细胞染色是在不影响活细胞活性的情况下,用染料在体外培养条件下对活细胞进行染色的方法。利用该方法,可以对培养物进行染色,继续培养。

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